El arte del Pipeteo con micropipetas.
La micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las distintas técnicas científicas.
Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales, denominados p20, p200 y p1000, admiten un máximo de 20, 200 y 1000 μl, respectivamente.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el aparato: para ello, se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son estériles. Existen varios tipos de puntas: por ejemplo, las amarillas para pipetear volúmenes pequeños (por ejemplo, 10 μl), y las azules para pipetear volúmenes grandes (por ejemplo, 800 μl).
Tipos
Existen micropipetas manuales, en las que el volumen a aspirar se fija girando un botón en su parte superior que está conectado a un sistema analógico de confirmación de volumen, y automáticas, en las cuales dicho sistema es digital.
Hay micropipetas simples, que sólo acogen una punta cada vez, y multicanales, que permiten incorporar múltiples puntas (por ejemplo, ocho), absorbiendo el mismo volumen en todas ellas.
Actualmente, se reconocen fácilmente en el mercado dos de las mejores marcas que existen: Eppendorf y Nichiryo.
Operación del Equipo
Técnica de pipeteo para líquidos claros:
a. Se presiona el botón superior suavemente hasta el primer tope.
b. Se sumerge la punta, en la solución que se necesita pipetear estando seguros que la punta este bien colocada y que no haya ningún tipo de residuos entre la punta y el cuerpo de la pipeta.
c. Mantenga la pipeta verticalmente mientras toma la solución.
d. Para descartar la solución de la punta presione el botón hasta el segundo tope.
e. Descarte las puntas utilizando el eyector que traen las pipetas.
Técnica de pipeteo para líquidos con alta viscosidad:
a. Presione el botón superior hasta el segundo tope.
b. Sumerja la punta en la solución (2-3 mm) y suelte el botón despacio. La punta tiene que estar bien llena.
c. Descarte el líquido de la punta presionando suavemente el botón superior hasta el primer tope.
Cuidados y Mantenimiento del Equipo
a. Iniciar el día limpiando la parte externa de las pipetas de polvo o suciedad.
b. Use solamente ethanol al 70% para la limpieza de la pipeta. Otro tipo de solvente no es aconsejable.
c. Utilizar las puntas adecuadas a las pipetas y a la cantidad de solución que se va a medir.
d. El pistón y el cilindro pueden ser chequeados dos veces al año si la pipeta es usada diariamente.
El mantenimiento preventivo de la pipeta tiene que ser realizado por personal especializado de mantenimiento.
El pipeteado es la única operación exacta de aspiración y expulsión de líquidos. Las pipetas con cojín de aire se emplean para pipetear líquidos acuosos en el rango de microlitros a mililitros. Funciona según el principio de cojín de aire (air interface).
Pipetear con pipetas con cojín de aire
Al desplazar hacia arriba y abajo el émbolo en el vástago de la pipeta, se produce un vacío parcial o bien una sobrepresión en el vástago. De esta manera se aspira el líquido hacia la punta, o bien se expulsa. El líquido queda separado del émbolo mediante un cojín de aire.
Ventaja
Ninguna humectación del aparato, ya que el líquido sólo entra en la punta siendo ésta desechable. Esto garantiza un trabajo libre de residuos – un factor especialmente importante en campos en los cuales debe realizarse el trabajo de forma estéril o libre de contaminación.
Calibración
En el marco del control de los medios de análisis según ISO y las directivas BPL se exige una calibración (o sea comprobación) de la exactitud de los aparatos volumétricos a intervalos periódicos y, en caso necesario, su ajuste.
Pipetas monocanal mecánicas por ej. la Transferpette® S de BRAND
Tanto en el laboratorio de rutina como en la investigación, la precisión y la funcionalidad deben ser las características estándar de las pipetas de émbolo con cojín de aire. Aspirar el reactivo
1.- Presionar el pulsador de pipeteado hasta el primer tope. Mantenga el aparato en posición vertical y sumerja la punta en el líquido.
2.-Soltar lentamente el pulsador de pipeteado, para aspirar el líquido.
